The global tendency of the contemporary scientific studies is using alternative biologic models as substitutes of experimental animals. HET-CAM (The Hen's Egg Test on the Chorioallantoie Membrane Assay) is an alternative to in vivo tests involving experimental animals. This test is actively used in different biomedical studies. The aim of our work was to study the irritating potential of adhesives used in shoe making industry in experimental setting using the alternative HET-CAM method. Polyurethane, polychloroprene, rubber and styrene-butadiene adhesives that are widely used in shoe-making industry were studied . HET-CAM test was used for the evaluation of the irritating action of the aforementioned adhesives. All adhesives were applied directly onto the chorioallantoic membrane of chick embryos with reactions and changes (hemorrhages, vascular lysis and coagulation) observed and registered in 30, 120 and 300 seconds after the application of the adhesive. Irritating potential of the adhesives was evaluated according to a calculated irritating index. The most pronounced signs of irritating action were caused by polyurethane adhesives, namely hemorrhages and coagulation (30 sec) – two-component adhesive and hemorrhages (30 sec) and coagulation (120-300 sec) – one-component adhesive. Vascular reactions from application of styrene-butadiene adhesives manifested predominantly with lysis and hemorrhages (30 sec), in some samples these reactions were observed at a later time-point (120-300 sec). Irritating action of rubber adhesives manifested mostly with hemorrhages (30 sec), one observation showed lysis (120 sec). Polychloroprene adhesive caused hemorrhages (30-120 sec) and also lysis (30 sec) in one of the samples. According to the irritating index, polyurethane (one- and two-component) and styrene-butadiene adhesives were estimated to be strong irritants, while rubber and polychloroprene ones cause
moderate irritating action. НЕТ-САМ test can be used as a component in the evaluation of evidence of irritating action of shoe adhesives. 

Key words: shoe adhesives, irritating action, the hen's egg test on the chorioallantoie membrane assay, in vitro method

Глобальною тенденцією сучасних досліджень є використання альтернативних біологічних моделей на заміну чи обмеження експериментів на
тваринах. HET-CAM (The Hen's Egg Test on the Chorioallantoie Membrane Assay) тест служить альтернативою тестів in vivo на експериментальних тваринах та активно використовується в різних галузях біомедичних досліджень. Метою роботи було дослідити в експериментальних умовах подразнювальний потенціал взуттєвих адгезивів з використанням альтернативного методу HET-CAM. Досліджували поліуретанові, поліхлоропренові,
каучукові та стирол-бутадієнові адгезиви, які використовуються в технології виготовлення взуття. Для оцінки подразнювальної дії клейових сполук використано метод HET-CAM. Клей у нативному вигляді наносили безпосередньо на поверхню хоріоалантоїсної оболонки курячих ембріонів та спостерігали за змінами та реакціями: виникненнями геморагій, лізисом судин та коагуляцією. Ці ефекти відстежували через 30, 120 та 300 с від часу нанесення клею на хоріоалантоїсну оболонку. За розрахованим індексом подразнення оцінювали іритативну активність адгезивів. Найбільші прояви подразнювальної дії зафіксовані при нанесенні поліуретанових адгезивів, а саме: геморагії та коагуляція (30 с) – двокомпонентний адгезив; геморагії (30 с) і коагуляція (120-300 с) –однокомпонентний адгезив. Судинні реакції від нанесення стирол-бутадієнових клеїв проявилися переважно лізисом, геморагіями (30с), в окремих зразках ці зміни проявилися пізніше (120-300 с), коагуляцією в трьох пробах (30 с або 300 с). Подразнювальний потенціал каучукового клею проявляється переважно геморагіями (30 с), в одній пробі також і лізисом (120 с); поліхлоропренового клею – переважно геморагіями (30-120 с) та лізисом (30 с) одного зразка. За значенням індексу подразнення поліуретанові (одно- і двокомпонентні), стирол-бутадієнові адгезиви оцінено як сильні подразники, каучуковий та поліхлоропреновий – помірної подразнювальної дії. НЕТ-САМтест може використовуватися як складова оцінки доказовості подразнювальної дії взуттєвих адгезивів. 

Ключові слова: взуттєві адгезиви, подразнювальний ефект, тест на хоріоалантоїсній оболонці курячого яйця, метод in vitro

Introduction. Poor regulation of active substances in disinfectants in Ukraine holds their legalization on the national market. Cluster approach in the hygienic regulation practice is one of the ways to address this issue. The aim of the study is to establish group-based hygiene regulations for the benzalkonium chloride (BC) cluster. Materials and methods of research. The subject of research is BC homologues. The research is based on the analysis of national and international scientific publications and legislative acts regarding BC toxic effects and hygienic regulations. Results. BC is a mixture of the benzalkonium chloride compounds homologues. The homologues ratio in a mixture plays a key role in assigning CAS numbers to BC. The average lethal doses with oral administration for all BC homologues are below 500 mg/kg. BC skin and oral absorption does not exceed 10 %. BC does not affect reproductive system and does not cause neonatal development abnormalities; it has no carcinogenic and mutagenic properties. Typical adverse effects of BC are related to compound irritant activity. Pursuant to EU regulation 1907/2006, substances with similar physicochemical, toxicological and ecotoxicological properties can be considered as a cluster. The data for reference substance of the cluster make it possible to predict the impact of other substances from this group on human health and environment. In case of BC, alkyl (C12–C16) dimethylbenzylammonium chloride was chosen as the reference substance. In Ukraine, the hygienic regulation sets 0.5 mg/m3 as occupational exposure limit for this substance. Following the clusters principle, it is advisable to introduce group hygiene regulations for all BC homologues based on alkyl (C12–C16) dimethylbenzylammonium chloride.
Conclusions. The implementation of cluster approach when developing exposure limits for chemical compounds in environmental medium makes it possible to introduce group hygienic regulations of 0.5 mg/m3 as occupational exposure limit for all BC homologues.
Key words: alkylbenzyldimethylammonium chloride, benzalkonium chloride, hygiene norm, cluster approach, group hygienic regulations